Канд. биол. наук, ст. науч. сотр. отд. генетической токсикологии, ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора, 141014, Московская область, Мытищи.
e-mail: egorovaov@fferisman.ru
MD,PhD, senior researcher of the department of genetic toxicology, “Federal Scientific Center of Hygiene named after F.F. Erisman” of the Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing, Mytishchi, 141014, Russian Federation.
e-mail: egorovaov@fferisman.ru
Введение. Метод оценки частоты обратных генных мутаций на бактериях (тест Эймса) нашёл широкое применение в практике тестирования мутагенной активности химических веществ. Уровень спонтанного мутирования индикаторных культур является обязательной характеристикой, подлежащей контролю в лаборатории, выполняющей исследования с помощью теста Эймса. В связи с этим важной задачей является оценка факторов, которые могут влиять на уровень спонтанных мутаций в эксперименте и, следовательно, на общее заключение о мутагенности объекта испытания.
Материалы и методы. В эксперименте использовали стандартный чашечный тест без метаболической активации и в присутствии микросомной активирующей смеси.
Результаты. В настоящей работе обобщены данные исторического контроля, полученные в лаборатории в период 2016–2020 гг., установлены пределы колебаний числа ревертантных колоний по каждому штамму и выявлены факторы вариабельности отрицательного контроля. Не обнаружено значимых отличий в формировании спонтанного фона индикаторных культур при использовании ДМСО или воды в качестве растворителей, пробирок из полипропилена или полистирола, а также чашек Петри разных типов. В случае культур ТА1535, ТА102 и ТА100 не выявлено влияния присутствия смеси S9 в эксперименте на спонтанный фон реверсии (р ≤ 0,05). Статистически достоверные отличия количества спонтанных ревертантов (при +S9 или –S9) были найдены для штаммов ТА97 и ТА98. Показано, что важными факторами, приводящими к вариабельности исторического отрицательного контроля, являются объём селективной среды и марка желирующего агента в её составе.
Заключение. Для обеспечения качества экспериментов, согласно принципам надлежащей лабораторной практики и достоверности данных, получаемых с использованием метода оценки обратных генных мутаций, необходима стандартизация операций, предваряющих постановку теста Эймса.
Участие авторов:
Егорова О.В. — концепция и дизайн исследования, сбор литературных данных, сбор материала, анализ результатов, статистическая обработка, написание текста;
Демидова Ю.В. — сбор материала;
Илюшина Н.А. — анализ результатов, написание текста.
Все соавторы — утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех частей статьи.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов в связи с публикацией данной статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Introduction. The bacterial reverse gene mutations test (the Ames test) is widely used to assess chemicals’ mutagenic activity. The spontaneous mutation level of test strains is a mandatory characteristic that has to be monitored in a laboratory performing mutagenicity studies using the Ames test. In this regard, it is important to assess the factors affecting the spontaneous mutation level in the experiment and, therefore, on the general conclusion on the test item mutagenicity.
Material and methods. A plate incorporation test version was used both in the presence and absence of a metabolic activation system.
Results. We summarized the historical control data obtained in the laboratory in 2016-2020, determine the fluctuation limits in the number of revertant colonies for each strain, and identify the factors affecting the negative control variability. No significant differences were found in the spontaneous background of test strains when using DMSO or water as solvents, polypropylene or polystyrene tubes, as well as Petri dishes of different types. In the case of the TA1535, TA102 and TA100 cultures, no influence of the presence of the S9 mixture on the spontaneous reversion range was revealed (p≤0.05). Statistically significant differences in the number of spontaneous revertants (at + S9 or -S9) were found for the strains that allow detecting frameshift mutations, TA97 and TA98. It has been shown that the volume of the selective medium and the brand of gelling agent in its composition are important factors leading to the variability of the historical negative control.
Conclusion. To ensure the quality of experiments according to the principles of good laboratory practice and the reliability of the data obtained using the bacterial reverse mutation method, it is necessary to standardize the operations in advance of experiments.
Contribution:
Egorova O.V. — the concept and design of the study, collection and processing of material, statistical analysis, writing a text;
Demidova Yu.V. — collection of material;
Ilyushina N.A. — processing of material, writing a text.
All authors are responsible for the integrity of all parts of the manuscript and approval of the manuscript final version
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgment. The study had no sponsorship.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.