medlitГигиена и санитарияHygiene and Sanitation0016-99002412-0650Federal Scientific Center of Hygiene named after F.F. Erisman10.47470/0016-9900-2025-104-8-1080-1084nlhwqumedlit-5105Research ArticleПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ТОКСИКОЛОГИЯ И ГИГИЕНИЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕPREVENTIVE TOXICOLOGY AND HYGIENIC STANDARTIZATIONМетаболомное исследование крови животных после ингаляционного воздействия наночастиц оксида свинцаMetabolomic study of animal blood after subchronic and chronic inhalation exposure to lead oxide nanoparticleshttps://orcid.org/0000-0002-5576-365XУнесихинаМария СергеевнаUnesikhinaMaria S.

Мл. науч. сотр. отд. молекулярной биологии и электронной микроскопии ФБУН «ЕМНЦ ПОЗРПП» Роспотребнадзора, 620014, Екатеринбург, Россия

e-mail: unesihinams@ymrc.ru

Junior researcher, Department of Molecular Biology and Electron Microscopy, Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers, Yekaterinburg, 620014, Russian Federation

unesihinams@ymrc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0097-7845МинигалиеваИльзира АмировнаMinigalievaIlzira A.

Доктор биол. наук, зав. отд. токсикологии и биопрофилактики ФБУН «ЕМНЦ ПОЗРПП» Роспотребнадзора, 620014, Екатеринбург, Россия

e-mail: ilzira-minigalieva@yandex.ru

DSc (Biology), head, Department of Toxicology and Bioprophylaxis, Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers, Yekaterinburg, 620014, Russian Federation

ilzira-minigalieva@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1743-7642СутунковаМарина ПетровнаSutunkovaMarina P.

Доктор мед. наук, директор ФБУН «ЕМНЦ ПОЗРПП» Роспотребнадзора, 620014, Екатеринбург, Россия

e-mail: sutunkova@ymrc.ru

DSc (Medicine), Director, Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers, Yekaterinburg, 620014, Russian Federation

sutunkova@ymrc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8794-7288КикотьАнна МихайловнаKikotAnna M.

Науч. сотр. отд. молекулярной биологии и электронной микроскопии ФБУН «ЕМНЦ ПОЗРПП» Роспотребнадзора, 620014, Екатеринбург, Россия

e-mail: kikotam@ymrc.ru

Researcher, Department of Molecular Biology and Electron Microscopy, Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers, Yekaterinburg, 620014, Russian Federation

kikotam@ymrc.ruФБУН «Екатеринбургский медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» РоспотребнадзораРоссияYekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial WorkersRussian FederationФБУН «Екатеринбургский медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Роспотребнадзора; ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава РоссииРоссияYekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers; Ural State Medical UniversityRussian Federation202527092025104810801084Copyright © Унесихина М.С., Минигалиева И.А., Сутункова М.П., Кикоть А.М., 20252025Унесихина М.С., Минигалиева И.А., Сутункова М.П., Кикоть А.М.Unesikhina M.S., Minigalieva I.A., Sutunkova M.P., Kikot A.M.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.rjhas.ru/jour/article/view/5105Введение

Введение. Выбросы при различных технологических процессах и широкое применение наночастиц оксида свинца (НЧ PbO) определяют необходимость оценки их токсичности. Использование методов нецелевой метаболомики крови для изучения воздействия НЧ PbO на организм млекопитающих ранее в литературе не описывалось.

Цель работы – применение метаболомного анализа для изучения субхронического и хронического ингаляционного воздействия НЧ PbO на лабораторных животных.

Материалы и методы

Материалы и методы. Эксперимент проведён на 50 самках крыс, случайным образом разделённых на равные группы. Часть животных подвергалась ингаляционному воздействию НЧ PbO в течение двух месяцев: опытная группа и контроль. Другая часть животных подвергалась ингаляционному воздействию НЧ PbO в течение восьми месяцев: опытная группа и контроль. Концентрация НЧ PbO в зоне дыхания животных составляла 0,215 мг/м3. Полуколичественный метаболомный анализ крови проводился с помощью жидкостной хромато-масс-спектрометрии.

Результаты

Результаты. По результатам метаболомного анализа крови животных после двух месяцев воздействия было выявлено снижение содержания пяти лизофосфатидилхолинов (LPC), трёх лизофасфатидилэтаноламинов (LPE) и увеличение содержания одного LPC. При этом установлено, что воздействие НЧ PbO в той же концентрации в течение восьми месяцев вызывало увеличение содержания пяти LPC, четырёх ацилкарнитинов, двух полиненасыщенных жирных кислот, а также снижение одного LPC. Построенные ROC-кривые комбинации обнаруженных метаболитов имели значение AUC = 0,975 для субхронического воздействия и AUC = 0,948 для хронической экспозиции.

Ограничения исследования

Ограничения исследования. Данная работа выполнена на самках крыс породы Wistar и не учитывает возможных межполовых различий.

Заключение

Заключение. Метаболомные изменения крови после ингаляционного воздействия НЧ PbO в концентрации 0,215 мг/м3 характеризуются разнонаправленным нарушением липидного обмена на разных сроках, свидетельствующим, вероятно, об аутофагии после субхронического воздействия и апоптозе после хронической экспозиции.

Соблюдение этических стандартов. Исследования были одобрены локальным этическим комитетом ФБУН ЕМНЦ ПОЗРПП Роспотребнадзора (протокол № 4 от 12.07.2022 г.).

Участие авторов

Участие авторов: Унесихина М.С. – сбор материала и обработка данных, статистическая обработка, написание текста, редактирование; Минигалиева И.А. – концепция и дизайн исследования, редактирование; Кикоть А.М. – редактирование; Сутункова М.П. – концепция и дизайн исследования, редактирование. Все соавторы – утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех её частей.

Конфликт интересов

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов в связи с публикацией данной статьи.

Финансирование

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Поступила

Поступила: 10.02.2025 / Поступила после доработки: 18.06.2025 / Принята к печати: 26.06.2025 / Опубликована: 25.09.2025

Introduction

Introduction. High emissions from various technological processes and the increasing practical use of lead oxide nanoparticles (NPs PbO) make it relevant to assess their toxicity. The use of non-targeted blood metabolomics methods to study the effects of NPs PbO on mammalian organisms has not previously been described in the literature.

The purpose of this work

The purpose of this work. To apply metabolomic analysis to study the subchronic and chronic inhaled effects of NPs PbO on laboratory animals.

Materials and methods

Materials and methods. The experiment was conducted on fifty female rats randomly divided into equal groups. Some of the animals were exposed to inhaled NPs PbO for 2 months: experimental group and control. Another part of the animals was exposed to inhaled NPs PbO for 8 months: the experimental group and the control. The concentration of NPs PbO in the respiration zone of the animals was 0.215 mg/m3. A semi-quantitative metabolomic blood test was performed using liquid chromatography-mass spectrometry.

Results

Results. According to the results of a metabolomic analysis of animal blood after 2 months of exposure, a decrease in the content of 5 LPC, 3 LPE and an increase in the content of 1 LPC were detected. At the same time, exposure to NPs PbO in the same concentration for 8 months was shown to cause an increase in the content of 5 LPC, 4 acylcarnitines, 2 polyunsaturated fatty acids, as well as a decrease in 1 LPC. The constructed ROC curves for the combination of the detected metabolites had an AUC = 0.975 for subchronic exposure and AUC = 0.948 for chronic exposure.

Limitations

Limitations. The study was conducted using female Wistar rats with no potential sex differences taken into account.

Conclusion

Conclusion. Metabolic changes in the blood after inhaled exposure to NPs PbO at a concentration of 0.215 mg/m3 are characterized by a multidirectional violation of lipid metabolism at different periods, probably indicating autophagy after subchronic exposure and apoptosis after chronic exposure.

Compliance with ethical standards. Ethics approval was provided by the institutional Ethics Committee of the Yekaterinburg Medical Research Center for Prophylaxis and Health Protection in Industrial Workers (protocol No. 4 of July 12, 2022).

Contribution

Contribution: Unesikhina M.S. — data collection and processing, draft manuscript preparation, editing; Minigalieva I.A. — study conception and design, editing; Kikot A.M. — editing; Sutunkova M.P. — study conception and design, editing. All authors are responsible for the integrity of all parts of the manuscript and approval of the manuscript final version.

Conflict of interest

Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

Funding

Funding. The study had no sponsorship.

Received

Received: February 10, 2025 / Revised: June 18, 2025 / Accepted: June 26, 2025 / Published: September 25, 2025

метаболитынаночастицы свинцатоксичность наночастицэксперимент in vivometaboliteslead nanoparticlestoxicity of nanoparticlesin vivo experimentReferencesJohnson C.H., Gonzalez F.J. Challenges and opportunities of metabolomics. J. Cell. Physiol. 2012; 227(8): 2975–81. https://doi.org/10.1002/jcp.24002Johnson C.H., Gonzalez F.J. Challenges and opportunities of metabolomics. J. Cell. Physiol. 2012; 227(8): 2975–81. https://doi.org/10.1002/jcp.24002Zhang L.J., Qian L., Ding L.Y., Wang L., Wong M.H., Tao H.C. Ecological and toxicological assessments of anthropogenic contaminants based on environmental metabolomics. Environ. Sci. Ecotechnol. 2021; 5: 100081. https://doi.org/10.1016/j.ese.2021.100081Zhang L.J., Qian L., Ding L.Y., Wang L., Wong M.H., Tao H.C. Ecological and toxicological assessments of anthropogenic contaminants based on environmental metabolomics. Environ. Sci. Ecotechnol. 2021; 5: 100081. https://doi.org/10.1016/j.ese.2021.100081Ochoa-Leite C., Rodrigues S., Ramos A.S., Ribeiro F., Barbosa J., Jerónimo C., et al. Metabolomics and proteomics in occupational medicine: a comprehensive systematic review. J. Occup. Med. Toxicol. 2024; 19(1): 38. https://doi.org/10.1186/s12995-024-00436-3Ochoa-Leite C., Rodrigues S., Ramos A.S., Ribeiro F., Barbosa J., Jerónimo C., et al. Metabolomics and proteomics in occupational medicine: a comprehensive systematic review. J. Occup. Med. Toxicol. 2024; 19(1): 38. https://doi.org/10.1186/s12995-024-00436-3Liu L., Wu Q., Miao X., Fan T., Meng Z., Chen X., et al. Study on toxicity effects of environmental pollutants based on metabolomics: A review. Chemosphere. 2022; 286(Pt. 2): 131815. https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2021.131815Liu L., Wu Q., Miao X., Fan T., Meng Z., Chen X., et al. Study on toxicity effects of environmental pollutants based on metabolomics: A review. Chemosphere. 2022; 286(Pt. 2): 131815. https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2021.131815Bratovcic A. Synthesis, characterization, applications, and toxicity of lead oxide nanoparticles. In: Chooto P., ed. Lead Chemistry. IntechOpen; 2020. https://doi.org/10.5772/intechopen.91362Bratovcic A. Synthesis, characterization, applications, and toxicity of lead oxide nanoparticles. In: Chooto P., ed. Lead Chemistry. IntechOpen; 2020. https://doi.org/10.5772/intechopen.91362Tulinska J., Krivosikova Z., Liskova A., Lehotska Mikusova M., Masanova V., Rollerova E., et al. Six-week inhalation of lead oxide nanoparticles in mice afects antioxidant defense, immune response, kidneys, intestine and bones. Environ. Sci. Nano. 2022; 9(2): 751–66. https://doi.org/10.1039/D1EN00957ETulinska J., Krivosikova Z., Liskova A., Lehotska Mikusova M., Masanova V., Rollerova E., et al. Six-week inhalation of lead oxide nanoparticles in mice afects antioxidant defense, immune response, kidneys, intestine and bones. Environ. Sci. Nano. 2022; 9(2): 751–66. https://doi.org/10.1039/D1EN00957ESutunkova M.P., Solovyeva S.N., Chernyshov I.N., Klinova S.V., Gurvich V.B., Shur V.Y., et al. Manifestation of systemic toxicity in rats after a short-time inhalation of lead oxide nanoparticles. Int. J. Mol. Sci. 2020; 21(3): 690. https://doi.org/10.3390/ijms21030690Sutunkova M.P., Solovyeva S.N., Chernyshov I.N., Klinova S.V., Gurvich V.B., Shur V.Y., et al. Manifestation of systemic toxicity in rats after a short-time inhalation of lead oxide nanoparticles. Int. J. Mol. Sci. 2020; 21(3): 690. https://doi.org/10.3390/ijms21030690Miller A., Drake P.L., Hintz P., Habjan M. Characterizing exposures to airborne metals and nanoparticle emissions in a refinery. Ann. Occup. Hyg. 2010; 54(5): 504–13. https://doi.org/10.1093/annhyg/meq032Miller A., Drake P.L., Hintz P., Habjan M. Characterizing exposures to airborne metals and nanoparticle emissions in a refinery. Ann. Occup. Hyg. 2010; 54(5): 504–13. https://doi.org/10.1093/annhyg/meq032Lebedová J., Nováková Z., Večeřa Z., Buchtová M., Dumková J., Dočekal B., et al. Impact of acute and subchronic inhalation exposure to PbO nanoparticles on mice. Nanotoxicology. 2018; 12(4): 290–304. https://doi.org/10.1080/17435390.2018.1438679Lebedová J., Nováková Z., Večeřa Z., Buchtová M., Dumková J., Dočekal B., et al. Impact of acute and subchronic inhalation exposure to PbO nanoparticles on mice. Nanotoxicology. 2018; 12(4): 290–304. https://doi.org/10.1080/17435390.2018.1438679Katsnelson B.A., Privalova L.I., Sutunkova M.P., Minigalieva I.A., Gurvich V.B., Shur V.Ya., et al. Experimental research into metallic and metal oxide nanoparticle toxicity in vivo. In: Yan B., Zhou H., Gardea-Torresdey J., eds. Bioactivity of Engineered Nanoparticles. Singapore: Springer; 2017: 259–319.Katsnelson B.A., Privalova L.I., Sutunkova M.P., Minigalieva I.A., Gurvich V.B., Shur V.Ya., et al. Experimental research into metallic and metal oxide nanoparticle toxicity in vivo. In: Yan B., Zhou H., Gardea-Torresdey J., eds. Bioactivity of Engineered Nanoparticles. Singapore: Springer; 2017: 259–319.Manuja A., Kumar B., Kumar R., Chhabra D., Ghosh M., Manuja M., et al. Metal/metal oxide nanoparticles: Toxicity concerns associated with their physical state and remediation for biomedical applications. Toxicol. Rep. 2021; 8: 1970–8. https://doi.org/10.1016/j.toxrep.2021.11.020Manuja A., Kumar B., Kumar R., Chhabra D., Ghosh M., Manuja M., et al. Metal/metal oxide nanoparticles: Toxicity concerns associated with their physical state and remediation for biomedical applications. Toxicol. Rep. 2021; 8: 1970–8. https://doi.org/10.1016/j.toxrep.2021.11.020Сутункова М.П., Минигалиева И.А., Клинова С.В., Рябова Ю.В., Тажигулова А.В., Шабардина Л.В. и др. Оценка острой токсичности наночастиц оксида свинца на крысах при ингаляционной экспозиции. Здоровье населения и среда обитания – ЗНиСО. 2023; 31(9): 24–30. https://doi.org/10.35627/2219-5238/2023-31-9-24-30 https://elibrary.ru/pmuwvcSutunkova M.P., Minigalieva I.A., Klinova S.V., Ryabova Yu.V., Tazhigulova A.V., Shabardina L.V., et al. Acute toxicity induced by inhalation exposure to lead oxide nanoparticles in rats. Zdorov’e naseleniya i sreda obitaniya – ZNiSO. 2023; 31(9): 24–30. https://doi.org/10.35627/2219-5238/2023-31-9-24-30 https://elibrary.ru/pmuwvc (in Russian)Берёза И.А., Шаихова Д.Р., Амромина А.М., Рябова Ю.В., Минигалиева И.А., Сутункова М.П. Индукция апоптоза на молекулярно-генетическом уровне под воздействием наночастиц оксида свинца в хроническом эксперименте на животных. Гигиена и санитария. 2024; 103(2): 152–7. https://doi.org/10.47470/0016-9900-2024-103-2-152-157 https://elibrary.ru/pgujbaBereza I.A., Shaikhova D.R., Amromina A.M., Ryabova Yu.V., Minigalieva I.A., Sutunkova M.P. Induction of apoptosis at the molecular genetic level exposed to lead oxide nanoparticles in a chronic animal experiment. Gigiena i Sanitaria (Hygiene and Sanitation, Russian journal). 2024; 103(2): 152–7. https://doi.org/10.47470/0016-9900-2024-103-2-152-157 https://elibrary.ru/pgujba (in Russian)Сутункова М.П., Соловьёва С.Н., Чернышов И.Н., Клинова С.В., Гурвич В.Б., Шур В.Я. и др. Проявления подострой системной токсичности наночастиц оксида свинца при ингаляционной экспозиции крыс. Токсикологический вестник. 2020; (6): 3–13. https://doi.org/10.36946/0869-7922-2020-6-3-13 https://elibrary.ru/gpvvhaSutunkova M.Р., Solovyeva S.N., Chernyshov I.N., Klinova S.V., Gurvich V.B., Shur V.Ya., et al. Manifestations of subacute systemic toxicity of lead oxide nanoparticles in rats after an inhalation exposure. Toksikologicheskii vestnik. 2020; (6): 3–13. https://doi.org/10.36946/0869-7922-2020-6-3-13 https://elibrary.ru/gpvvha (in Russian)HMBD. Available at: https://hmdb.ca/HMBD. Available at: https://hmdb.ca/LIPID MAPS. Available at: https://lipidmaps.org/LIPID MAPS. Available at: https://lipidmaps.org/MassBank. Available at: https://massbank.eu/MassBank/MassBank. Available at: https://massbank.eu/MassBank/MetaboAnalyst 6.0. Available at: https://www.metaboanalyst.ca/MetaboAnalyst 6.0. Available at: https://www.metaboanalyst.ca/Lv X.H., Zhao D.H., Cai S.Z., Luo S.Y., You T., Xu B.L., et al. Autophagy plays a protective role in cell death of osteoblasts exposure to lead chloride. Toxicol. Lett. 2015; 239(2): 131–40. https://doi.org/10.1016/j.toxlet.2015.09.014Lv X.H., Zhao D.H., Cai S.Z., Luo S.Y., You T., Xu B.L., et al. Autophagy plays a protective role in cell death of osteoblasts exposure to lead chloride. Toxicol. Lett. 2015; 239(2): 131–40. https://doi.org/10.1016/j.toxlet.2015.09.014Dupont N., Chauhan S., Arko-Mensah J., Castillo E.F., Masedunskas A., Weigert R., et al. Neutral lipid stores and lipase PNPLA5 contribute to autophagosome biogenesis. Curr. Biol. 2014; 24(6): 609–20. https://doi.org/10.1016/j.cub.2014.02.008Dupont N., Chauhan S., Arko-Mensah J., Castillo E.F., Masedunskas A., Weigert R., et al. Neutral lipid stores and lipase PNPLA5 contribute to autophagosome biogenesis. Curr. Biol. 2014; 24(6): 609–20. https://doi.org/10.1016/j.cub.2014.02.008Liu J., Liao G., Tu H., Huang Y., Peng T., Xu Y., et al. A protective role of autophagy in Pb-induced developmental neurotoxicity in zebrafish. Chemosphere. 2019; 235: 1050–8. https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2019.06.227Liu J., Liao G., Tu H., Huang Y., Peng T., Xu Y., et al. A protective role of autophagy in Pb-induced developmental neurotoxicity in zebrafish. Chemosphere. 2019; 235: 1050–8. https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2019.06.227Wu Y., Chen Z., Darwish W.S., Terada K., Chiba H., Hui S.P. Choline and ethanolamine plasmalogens prevent lead-induced cytotoxicity and lipid oxidation in HepG2 cells. J. Agric. Food Chem. 2019; 67(27): 7716–25. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.9b02485Wu Y., Chen Z., Darwish W.S., Terada K., Chiba H., Hui S.P. Choline and ethanolamine plasmalogens prevent lead-induced cytotoxicity and lipid oxidation in HepG2 cells. J. Agric. Food Chem. 2019; 67(27): 7716–25. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.9b02485Chaurio R.A., Janko C., Muñoz L.E., Frey B., Herrmann M., Gaipl U.S. Phospholipids: key players in apoptosis and immune regulation. Molecules. 2009; 14(12): 4892–914. https://doi.org/10.3390/molecules14124892Chaurio R.A., Janko C., Muñoz L.E., Frey B., Herrmann M., Gaipl U.S. Phospholipids: key players in apoptosis and immune regulation. Molecules. 2009; 14(12): 4892–914. https://doi.org/10.3390/molecules14124892Montecillo-Aguado M., Tirado-Rodriguez B., Huerta-Yepez S. The involvement of polyunsaturated fatty acids in apoptosis mechanisms and their implications in cancer. Int. J. Mol. Sci. 2023; 24(14): 11691. https://doi.org/10.3390/ijms241411691Montecillo-Aguado M., Tirado-Rodriguez B., Huerta-Yepez S. The involvement of polyunsaturated fatty acids in apoptosis mechanisms and their implications in cancer. Int. J. Mol. Sci. 2023; 24(14): 11691. https://doi.org/10.3390/ijms241411691Sanchez-Macedo N., Feng J., Faubert B., Chang N., Elia A., Rushing E.J., et al. Depletion of the novel p53-target gene carnitine palmitoyltransferase 1C delays tumor growth in the neurofibromatosis type I tumor model. Cell Death Differ. 2013; 20(4): 659–68. https://doi.org/10.1038/cdd.2012.168Sanchez-Macedo N., Feng J., Faubert B., Chang N., Elia A., Rushing E.J., et al. Depletion of the novel p53-target gene carnitine palmitoyltransferase 1C delays tumor growth in the neurofibromatosis type I tumor model. Cell Death Differ. 2013; 20(4): 659–68. https://doi.org/10.1038/cdd.2012.168Кикоть А.М., Берёза И.А., Шаихова Д.Р., Рябова Ю.В., Минигалиева И.А., Сутункова М.П. Влияние наночастиц оксида свинца на экспрессию генов антиоксидантной системы и апоптоза в хроническом эксперименте. Медицина труда и промышленная экология. 2024; 64(5): 340–6. https://doi.org/10.31089/1026-9428-2024-64-5-340-346 https://elibrary.ru/ukbaatKikot A.M., Bereza I.A., Shaikhova D.R., Ryabova Yu.V., Minigalieva I.A., Sutunkova M.P. The effect of lead oxide nanoparticles on the expression of antioxidant system and apoptosis genes in a chronic experiment. Meditsina truda i promyshlennaya ekologiya. https://doi.org/10.31089/1026-9428-2024-64-5-340-346 https://elibrary.ru/ukbaat (in Russian)Li C., Shi L., Peng C., Yu G., Zhang Y., Du Z. Lead-induced cardiomyocytes apoptosis by inhibiting gap junction intercellular communication via autophagy activation. Chem. Biol. Interact. 2021; 337: 109331. https://doi.org/10.1016/j.cbi.2020.109331Li C., Shi L., Peng C., Yu G., Zhang Y., Du Z. Lead-induced cardiomyocytes apoptosis by inhibiting gap junction intercellular communication via autophagy activation. Chem. Biol. Interact. 2021; 337: 109331. https://doi.org/10.1016/j.cbi.2020.109331Xia J., Broadhurst D.I., Wilson M., Wishart D.S. Translational biomarker discovery in clinical metabolomics: an introductory tutorial. Metabolomics. 2013; 9(2): 280–99. https://doi.org/10.1007/s11306-012-0482-9Xia J., Broadhurst D.I., Wilson M., Wishart D.S. Translational biomarker discovery in clinical metabolomics: an introductory tutorial. Metabolomics. 2013; 9(2): 280–99. https://doi.org/10.1007/s11306-012-0482-9

The authors declare that there are no conflicts of interest present.