Preview

Гигиена и санитария

Расширенный поиск

Выделение эпителиальных клеток из образцов мочи человека для цитогенетической и цитотоксической оценки эффектов факторов среды микроядерным методом

https://doi.org/10.47470/0016-9900-2019-98-11-1235-1239

Полный текст:

Аннотация

Введение. Многочисленные исследовательские работы указывают на существование взаимосвязи между риском развития рака мочевого пузыря и увеличением в моче количества эксфолиативных эпителиальных клеток (ЭЭК) с микроядрами (МЯ). Поскольку рак в большинстве случаев развивается именно из эпителиальных клеток, необходима стандартизированная методика их выделения и анализа. При оценке мутагенности, токсичности фактора, класса опасности важно оценивать не только его цитогенетическое, но и цитотоксическое воздействие.

Материал и методы. В качестве метода выделения клеток из образцов мочи использовали модифицированный нами способ Stich. Для оценки цитогенетических повреждений в ЭЭК применяли МЯ-тест.

Результаты. Результатом наших исследований стала приведённая в статье упрощённая модифицированная методика выделения клеток из образцов мочи, их окраска, микрофото, критерии анализа цитогенетического и цитотоксического воздействия. Применяя модифицированную методику, мы нашли, что примерно 75% клеток в моче у женщин поступают в мочу из половой системы. При тампонаде уменьшается количество клеток плоского эпителия в среднем в 2 раза и уменьшается число лизированных клеток в среднем в 3,5 раза, но увеличивается в 2 раза показатель пролиферации (частота двуядерных клеток). При этом увеличивается чувствительность самого метода вследствие увеличения числа взятых в анализ уротелиальных клеток, которые обладают большей чувствительностью к цитогенетическим воздействиям. Предложенный нами расширенный протокол анализа ЭЭК мочи с фиксацией цитотоксических повреждений (частота встречаемости клеток с конденсацией, лизисом, вакуолизацией ядра) и изменений в пролиферации увеличивает чувствительность и информативность метода.

Заключение. Таким образом, разработанная нами модификация метода МЯ-теста в ЭЭК мочи является информативной – демонстрирует генотоксические и цитотоксические повреждения, изменения в пролиферации, наличие воспалительного процесса и его причину. Тест является экономичным, подходит для массового мониторинга населения, так как неинвазивный и позволяет собирать материал вне клиники.

Об авторе

Светлана Михайловна Иванова
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия

Кандидат биол. наук, научный сотрудник лаборатории генетической токсикологии с группой цитогистологии ФГБУ ЦСП Минздрава России, 119121, Москва.

e-mail: shersvetlana@bk.ru



Список литературы

1. Состояние онкологической помощи населению России в 2015 году. Под ред. Каприна А.Д., Старинского В.В., Петровой Г.В. М.; 2016.

2. Злокачественные новообразования в России в 2016 году (заболеваемость и смертность). Под ред. Каприна А.Д. Старинского В.В., Петровой Г.В. М.: МНИОИ им. П.А. Герцена, филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России; 2018. 250 с.

3. Kimura M., Umegaki K., Higuchi M., Thomas P., Fenech M. Methylenetetrahydrofolate Reductase C677T Polymorphism, Folic Acid and Riboflavin Are Important Determinants of Genome Stability in Cultured Human Lymphocytes. J Nutr. 2004; 134: 48-56

4. Сычева Л.П., Юрченко В.В., Журков В.С. Оценка мутагенной активности факторов окружающей среды в клетках разных органов млекопитающих микроядерным методом. Метод. рекомендации. М.; 2001. 22 с.

5. Бродский И.Б., Брянцева С.А., Ковалева А.М., Урюпова Е.Ф., Гусев С.А., Сергиенко В.И. и соавт. Микроядра как маркеры хромосомных изменений клеток. Журнал фундаментальной медицины и биологии. 2012; 4: 4-9.

6. Bonassi S. An increased micronucleus frequency in peripheral blood lymphocytes predicts the risk of cancer in humans. Carcinogenesis. 2007; 28: 625-31.

7. Pardini B. Increased micronucleus frequency in peripheral blood lymphocytes predicts the risk of bladder cancer. Br J Cancer. 2017; 116: 202-10.

8. Cairns J. Mutation selection and the natural history of cancer. Nature. 1975; 255: 197-200.

9. Stich H.F., Rosin M.P. Micronuclei in exfoliated human cells as a tool for studies in cancer risk and cancer intervention. Cancer Lett. 1984; 22: 241-53.

10. Hoyos-Giraldo L.S., Escobar-Hoyos L.F., Saavedra-Trujillo D., Reyes-Carvajal I., Muñoz A., Londoño-Velasco E. et al. Gene-specific promoter methylation is associated with micronuclei frequency in urothelial cells from individuals exposed to organic solvents and paints. J Expo Sci Environ Epidemiol. 2015; 1-6.

11. Freedman N.D., Silverman D.T., Hollenbeck A.R., Schatzkin A., Abnet C.C. Association between smoking and risk of bladder cancer among men and women. JAMA. 2011; 306 (7): 737-45.

12. Ghosh P., Basu A., Singh K.K., Giri A.K. Evaluation of cell types for assessment of cytogenetic damage in arsenic exposed population. Mol Cancer. 2008; 7: 45.

13. Krech E. et al. Urinary bladder cancer risk factors in an area of former coal, iron, and steel industries in Germany. J Toxicol Environ Health A. 2017; 80: 430-8.

14. Fenech M., Holland N., Zeiger E., Chang W.P., Burgaz S., Thomas P. et al. The HUMN and HUMNxL international collaboration projects on human micronucleus assays in lymphocytes and buccal cells-past, present and future. Mutagenesis. 2011; 26 (1): 239-45.

15. Gandhi G., Kaur B. Elevated frequency of Micronuclei in uterine smears of cervix cancer patients. Caryologia. 2003; 56: 217-22.

16. Tolbert P.E., Shy C.M., Allen J.W. Micronuclei and other nuclear anomalies in buccal smears: methods development. Mutat Res. 1992; 271: 69-77.

17. Vitale I., Galluzzi L., Castedo M., Kroemer G. Mitotic catastrophe: a mechanism for avoiding genomic instability. Nat Rev Mol Cell Biol. 2011; 12 (6): 385-92.

18. Сычева Л.П., Рахманин Ю.А., Губернский Ю.Д., Коваленко М.А., Шереметьева С.М., Можаева Т.Е. Диагностика экологически обусловленных нарушений здоровья человека путем оценки цитогенетического и кариологического статуса буккального и назального эпителия. В сб.: «Экологически обусловленные ущербы здоровью: методология, значение и перспективы оценки. Материалы Пленума НС по экологии человека и гигиене окружающей среды РАМН и МЗ и СР РФ 22-23 декабря 2005 г.». Под ред. Ю.А. Рахманина. М.; 2005: 488-90.

19. Беляева Н.Н., Сычева Л.П., Тепикина Л.А., Коваленко М.А., Шереметьева С.М., Шамарин А.А. и соавт. Необходимость использования морфофункциональных, цитогенетических и кариологических исследований при обосновании класса опасности лекарственных отходов. Сб. материалов III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медицинские отходы: проблемы и пути решения». М.; 2005: 22-3.

20. Юрченко В.В., Кривцова Е.К., Подольная М.А, Беляева Н.Н., Малышева А.Г., Дмитириева Р.А. и соавт. Микроядерный тест на эпителии щеки в комплексной оценке экологического благополучия детей в Москве. Гигиена и санитария. 2007; 6: 83-5.

21. Жулева Л.Ю., Умнова Н.В., Румак В.С. Регистрация микроядер в слущивающихся клетках слизистой ротовой полости человека на территории Южного Вьетнама. Генетика. 1996; 32 (12): 1700-4.

22. Коломиец Л.А., Чуруксаева О.П., Уразова Л.Н., Севостьянова Н.В. Особенности цервикальных клеток у женщин, инфицированных папилломавирусом HPV. Медицина в Кузбассе. 2005; 11: 39-41.

23. Сычева Л.П. Биологическое значение, критерии определения и пределы варьирования полного спектра кариологических показателей при оценке цитогенетического статуса человека. Медицинская генетика. 2007; 11: 3-11.

24. Kerr J.F.R., Wyllie А.H., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomen with wide-ranging implications in tissue kinetics. Brit J Cancer. 1972; 26: 239-57

25. Исакова Л.М., Ганина К.П., Иванова И.Мисоавт. Цитологические особенности клеток многослойного сквамозного эпителия шейки матки в зависимости от ассоциации патологических процессов с вирусом папилломы человека. Цитология и генетика. 1997; 31 (6): 3-11

26. Coman N., Ionescu M.D., Miscalencu D. Ultrastructural modifications at uterine cervix level induced by human papillomaviruses infections. Roum Arch Microbiol Immunol. 1999; 58 (1): 65-78

27. Сычева Л.П., Шарова М.А., Коваленко М.А., Шереметьева С.М., Журков B.C. Оценка мутагенной активности диоксазида полиорганным микроядерным методом в опыте на крысах. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005: 140 (11): 542-544.

28. Шереметьева С.М., Коваленко М.А. Оценка цитогенетического действия диоксида азота в клетках костного мозга, мочевого пузыря и легких крыс. Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных и специалистов «Окружающая среда и здоровье» (19-22 мая 2005 г, Суздаль). Суздаль; 2005: 511-4.

29. Беляева Н.Н. Клеточная восстановительная регенерация как биомаркёр вредного действия при гигиенической оценке факторов окружающей среды. Дис. … канд. биол. наук. М.; 1997. 266 с.

30. Бродский В.Я., Урываева И.В. Клеточная полиплоидия. Пролиферация и дифференцировка. М.: Наука; 1981. 237 с.

31. González Cid M., Loria D., Vilensky M., Miotti J.L., Matos E. Leather tanning workers chromosomal aberrations in peripheral lymphocytes and micronuclei in exfoliated cells in urine. Mutat Res. 1991; 259 (2): 197-201.

32. Gashi G. The association between micronucleus, nucleoplasmic bridges, and nuclear buds frequency and the degree of uterine cervical lesions. Biomarkers. 2018; 23: 364-72.

33. Аль-Шукри С.Х., Эмануэль В.Л., Корнеева И.А., Соколова Н.М., Агеев М.Н. Прогностическая ценность цитологического исследования осадка мочи у больных раком мочевого пузыря. Нефрология. 2006; 10 (3): 101-4.

34. Перепечин Д.В., Чернышев И.В., Лощилов Ю.А., Никонова Л.М. Особенности цитологического исследования мочи при хроническом воспалении уротелия. Врач-аспирант. 2013; 60 (5.1): 181-5.


Для цитирования:


Иванова С.М. Выделение эпителиальных клеток из образцов мочи человека для цитогенетической и цитотоксической оценки эффектов факторов среды микроядерным методом. Гигиена и санитария. 2019;98(11):1235-1239. https://doi.org/10.47470/0016-9900-2019-98-11-1235-1239

For citation:


Ivanova S.M. Separation of exfoliated epithelial cells from human urine samples for cytogenetic and cytotoxic evaluation of the effects of factors by the micronucleus assay. Hygiene and Sanitation. 2019;98(11):1235-1239. (In Russ.) https://doi.org/10.47470/0016-9900-2019-98-11-1235-1239

Просмотров: 15


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0016-9900 (Print)
ISSN 2412-0650 (Online)